构建了一种基于纳米抗体- 碱性磷酸酶融合蛋白的荧光酶免疫分析方法

  本团队构建了一种基于纳米抗体（Nb）-碱性磷酸酶（ALP）融合蛋白的荧光酶免疫分析方法（FEIA），用于检测 SARS-CoV-2刺突蛋白。通过柔性连接肽，将经基因改造的抗SARS-CoV-2刺突蛋白受体结合域（S-RBD）纳米抗体 Nb61 的基因序列与碱性磷酸酶基因序列进行融合，利用重组克隆技术构建出原核重组表达质粒Nb61-ALP-His。随后将该重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达，并采用比色法与荧光法验证了表达产物同时具备Nb61的抗原结合活性和碱性磷酸酶的酶学活性。

  团队基于Nb61-ALP融合蛋白对荧光酶免疫分析方法进行了条件优化与体系建立。该方法的检测下限为3.18 ng/mL，线性检测范围为1.9~62.5 ng/mL。与商品化检测试剂盒的对比实验证实，这种基于Nb61-ALP融合蛋白的荧光酶免疫分析方法在SARS-CoV-2刺突蛋白检测中具有良好的可靠性。研究结果表明，基于纳米抗体的酶免疫分析技术具备发展为 SARS-CoV-2快速精准检测工具的潜力。

文章链接：Development of a Nanobody-Alkaline Phosphatase Fusion Protein for Detection of SARS-CoV-2 Spike Protein in a Fluorescence Enzyme Immunoassay - PubMed